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植物Bt-Cry1Ac蛋白ELISA皇冠滚球注册|首页说明书
点击次数:1023 发布时间:2016-05-29

本皇冠滚球注册|首页只能用于科学研究,不得用于医学诊断

植物(Plant)Bt-Cry1Ac蛋白(Bt-Cry1Ac protein)

ELISA检测皇冠滚球注册|首页

使用说明书

检测原理

皇冠滚球注册|首页采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被Bt-Cry1Ac蛋白(Bt-Cry1Ac protein)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的Bt-Cry1Ac蛋白(Bt-Cry1Ac protein)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.? 样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

2.? 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。

3.? 植物萃取液或其它相关样本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测。

4.? 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

  1. 酶标仪(450nm)
  2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  3. 37℃恒温箱

操作注意事项

  1. ? 皇冠滚球注册|首页保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
  2. ? 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  3. ? 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,zui终结果乘以5才是样本实际浓度。
  4. ? 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
  5. ? 所有液体组分使用前充分摇匀。

皇冠滚球注册|首页组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8条

12孔×4条

标准品

0.3mL*6

0.3mL*6

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1

注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、0.5、1、2、4、8 ng/mL

试剂的准备

?20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

  1. ? 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
  2. ? 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步骤

  1. ? 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2. ? 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3. ? 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
  4. ? 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5. ? 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6. ? 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7. ? 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

?绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

皇冠滚球注册|首页性能

1. ?准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

2. ?灵敏度:zui低检测浓度小于0.1 ng/mL。

3. ?特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. ?重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

5. ?贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. ?有效期:6个月

免责声明

1. ??皇冠滚球注册|首页仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2. ??严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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